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高效液相色譜法測(cè)定辣椒紅素

　　摘要：采用超聲波輔助丙酮提取辣椒中的辣椒紅素，高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定。色譜條件為色譜柱：4.6×250mm，5um;流動(dòng)相：甲醇—二氯甲烷;流速：1ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng)：474nm;柱溫：30℃;進(jìn)樣量：10μl。結(jié)果表明，峰面積與待測(cè)物濃度呈良好的線性關(guān)系。

　　關(guān)鍵詞：辣椒紅素;高效液相色譜;測(cè)定

　　辣椒富含辣椒堿、二氫辣椒堿、辣椒紅素、辣椒玉紅素、β-胡蘿卜素、碳水化合物、維生素C以及鈣、磷等等。其中辣椒堿和二氫辣椒堿是辣椒中的辛辣成分，具有生理活性和持久的消炎鎮(zhèn)痛作用，內(nèi)服可以促進(jìn)胃液分泌，增進(jìn)食欲，緩解胃腸脹氣，改善消化功能和促進(jìn)血液循環(huán);外用可以用作治療牙痛，肌肉痛，風(fēng)濕病和皮膚病等疾病，對(duì)治療神經(jīng)痛有顯著療效。辣椒紅素、辣椒玉紅素已被美國(guó)FAO、英國(guó)、日本、EEC、WHO等組織審定為無(wú)限性使用的天然食品添加劑，其國(guó)際市場(chǎng)十分緊俏。目前，美國(guó)、德國(guó)、日本、韓國(guó)等國(guó)家對(duì)辣椒堿、辣椒紅素的提取技術(shù)及應(yīng)用開發(fā)研究已形成國(guó)際科技界的研究熱點(diǎn)。

　　1 材料與方法

　　1.1 主要材料與試劑干紅辣椒，辣椒紅素標(biāo)樣，純度93.3 %;甲醇(色譜級(jí))，丙酮(分析級(jí))，二氯甲烷(分析級(jí))，

　　1.2 主要儀器與設(shè)備

　　LC7000型高效液相色譜儀(包括LC7011泵，LC7050自動(dòng)進(jìn)樣器，LC7031注溫箱LC7060二極管陣列檢測(cè)器，色譜柱C18(250 ×4.6 mm，5μm))，Sine Sonic 150型超聲波洗凈機(jī)，TDL-40B型離心機(jī)，BS210S型賽多利斯電子分析天平，0.45 μm微孔濾膜。

　　1.3 試驗(yàn)方法

　　1.3.1 色譜條件

　　色譜柱：Inertsil OD-3，4.6×250mm，5μm，不銹鋼柱;流動(dòng)相：A-甲醇，B-二氯甲烷;流速為1ml/min;進(jìn)樣量：10μl;室溫：(28±2)℃;色譜柱溫度：30℃;檢測(cè)波長(zhǎng)：474nm，以峰面積外標(biāo)法定量。

　　1.3.2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

　　(1)檢測(cè)波長(zhǎng)的確定。稱取一定量的辣椒紅素標(biāo)準(zhǔn)品，用丙酮溶解后，配制成濃度為0.1mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，通過(guò)HPLC的紫外檢測(cè)器掃描得出辣椒紅素的最大吸收波長(zhǎng)。

　　(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。將辣椒紅素標(biāo)準(zhǔn)品5mg倒于10ml容量瓶中，加入丙酮至刻度，搖勻。逐級(jí)稀釋，分別配置成濃度為0.002 mg/ml，0.004 mg/ml，0.010 mg/ml，0.020 mg/ml，0.030 mg/ml，0.050 mg/ml，0.060 mg/ml，0.070 mg/ml，0.080 mg/ml，0.090 mg/ml，0.100 mg/ml，0.150 mg/ml，0.200 mg/ml的溶液，吸取10μl，上機(jī)檢測(cè)。根據(jù)標(biāo)樣的濃度與峰面積在Lcsolution工作站中得到標(biāo)準(zhǔn)曲線、回歸方程、線性范圍及相關(guān)系數(shù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　(3)精密度試驗(yàn)。取任意一樣品，連續(xù)5次進(jìn)樣，并對(duì)其進(jìn)行面積積分。本試驗(yàn)為了有針對(duì)性地考察，采用辣椒紅素標(biāo)準(zhǔn)品作為研究對(duì)象，分別吸取濃度為0.1mg/ml的辣椒紅素標(biāo)準(zhǔn)品溶液2μl，統(tǒng)計(jì)峰面積并計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD%。用于評(píng)價(jià)儀器的可靠性。

　　(4)重復(fù)性試驗(yàn)。稱取5份同一批樣品0.2g，分別加入5 ml丙酮，超聲波提取三次，3500r/m的情況下離心10min，收集提取液，定容到25ml，13000r/m的情況下離心20min，上機(jī)檢測(cè)。統(tǒng)計(jì)峰面積并計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD%。用于評(píng)價(jià)方法的可靠性。

　　(5)加樣回收率試驗(yàn)。根據(jù)參考文獻(xiàn)，分別稱取同一批樣品0.2g，共稱取6次，分別加入4ml丙酮，2個(gè)為一組平行，分別精密加入濃度為0.5mg/ml辣椒紅素標(biāo)準(zhǔn)溶液100μl，100μl，120μl，120μl，150μl，150μl。進(jìn)行HPLC方法測(cè)定�；厥章试囼�(yàn)用于評(píng)價(jià)測(cè)定方法的準(zhǔn)確性。

　　1.3.3 辣椒素與二氫辣椒素的超聲波輔助提取將樣品在30 ℃恒溫凍干后粉碎成粉末，處理后稱取0.5 g粉末樣品，加入一定量的丙酮，渦旋振蕩后在超聲波150 W，超聲時(shí)間25min，超聲溫度35℃，3500 r/min條件下離心10 min，將提取液倒入25 ml容量瓶中，連續(xù)提取3次[8]，收集提取液，丙酮定容，搖勻后，溶液過(guò)0.45 μm微孔濾膜，濾液取10 μl上機(jī)測(cè)定。

　　2 結(jié)果與討論

　　2.1 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

　　2.1.1 HPLC檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

　　在辣椒紅素最大吸收值處，得到它的光譜圖，如圖1。由圖1可以看到辣椒紅素的最大吸收波長(zhǎng)為474mm。

　　從表1的結(jié)果可見，用HPLC法測(cè)定辣椒中辣椒紅素含量，RSD為0.24%，表明該儀器的精密度良好，測(cè)定結(jié)果較滿意。

　　2.1.6 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

　　取同一批樣品5份，按照測(cè)定方法測(cè)定，結(jié)果見表2。

　　從表2結(jié)果可見，用HPLC法測(cè)定辣椒中辣椒紅素含量，RSD為0.20%，表明此方法的重復(fù)性好，測(cè)定結(jié)果較滿意。

　　2.1.7 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

　　分別稱取同一批樣品0.2g，共稱取6次，分別加入 4ml丙酮，2個(gè)為一組平行，加入不同量的辣椒紅素標(biāo)準(zhǔn)品。根據(jù)公式計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表3。

　　由回收率試驗(yàn)結(jié)果證明，以辣椒紅素為標(biāo)準(zhǔn)品，利用丙酮為提取劑，超聲波測(cè)定辣椒中辣椒紅素含量符合分析要求，證明了辣椒紅素的提取分析中此方法的可行性及準(zhǔn)確度高。

　　3 結(jié)論

　　(1)本研究結(jié)果顯示，提取劑為丙酮，固液比1：20，超聲時(shí)間25min，超聲溫度35℃，辣椒紅素得率為0.103%。

　　(2)HPLC測(cè)定辣椒紅素的最佳條件是：色譜柱：Inertsil OD-3，4.6×250mm，5μm，不銹鋼柱;流動(dòng)相：A-甲醇，B-二氯甲烷;流速為1ml/min;進(jìn)樣量：10μl;室溫：(28±2)℃;色譜柱溫度：30℃;檢測(cè)波長(zhǎng)：474mm，以峰面積外標(biāo)法定量。

　　(3)從天然農(nóng)作物中提取有效成分是今后食品工業(yè)的發(fā)展趨勢(shì)，開發(fā)純天然、低毒害、無(wú)污染的活性成分是目前研究的熱點(diǎn)之一。辣椒紅素是純天然的食品添加劑，有很好的應(yīng)用前景。

　　參考文獻(xiàn)

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高效液相色譜法測(cè)定辣椒紅素

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